Pengecatan Gram ( Escherichia coli)

Hari,tanggal        : Rabu, 28 Maret 2010

Judul                   : Pengecatan Gram ( Escherichia coli)

Meode                  : Pengacatan bertingkat dengan empat pewarnaa

Tujuan                : Untuk mengidentifikasi bakteri gram positif dan garam negarif

Prinsip                 :

1.      Pada pengecatan dengan Gram A semua bakteri berwarna violet.

2.      Pada penegcatan dengan Gram B terjadi perubahan, yang tadinya berwarna violet berubah menjadi violet tua – hitam.

3.      Pada pelunturan dengan Gram C, bakteri Gram positif ( + ) tetap berwarna violet sedangkan bakteri Gram negatif ( - ) menjadi tidak berwarna / pucat.

4.      Pada pengecatan dengan Gram D, bakteri yang Gram positif ( + ) tetap berwarna violet sedangkan bakteri yang Gram negatif ( - ) akan berwarna merah oleh safranin didalam Gram D.

5.      Gram positif menyerap warna ungu dari kristal violet

6.      Gram negatif menyerap warna merah dari safranin

Alat dan Bahan         :

Alat :

1.      Ose

2.      Cawan Petri

3.      Tabung Reaksi

4.      Bunsen

5.      Pipet Tetes

6.      Mikroskop

7.      Objek Glass

8.      Bekker Glas

Bahan :

1.      Suspensi Bakteri

2.      Gram A (Kristal Violet)

1)      2 gram Kristal violet

2)      20 ml alcohol 95%

3)      2 gram ammonium aksalat

4)      80 ml aquadest

3.      Gram B (lugol)

1)      1 gram yodium

2)      2 gram kalium yodida

4.      Gram C (alcohol)

1)      50 ml aseton

2)      50 ml alcohol 95%

5.      Gram D (Safranin)

1)      0,25 gram safranin

2)      10 ml alcohol 95%

3)      90 ml aquadest

Dasar Teori                :

Bakteri gram positif mempertahankan zat warna kristal violet sehingga tampak biru/ungu tua. Bakteri gram negatif kehilangan kristal violet ketika dicuci dengan alkohol dan sewaktu diberi safranin tampak  merah.

Perbedaan pewarnaan gram positif dengan gram negatif adalah pada komponen dinding sel nya. Pada gram positif kompleks zat warna dan yodium terperangkap antara dinding sel dan membran sitoplasma. Sedangkan pada gram negatif zat lipid dalam dinding sel dapat hilang karena pencucian alkohol sehingga kompleks zat warna dan yodium dapat disingkirkan dengan pencucian alkohol.

Bakteri gram posistif memiliki membram tunggal yang dilapisi peptidohlikan yang tebal (25-50nm) sedangkan bakteri negatif lapisan peptidoglikogennya tipis (1-3 nm).

Cara Kerja                :

1.      Bersihkan objek glassdengan kapas yang telah di basahi alkohol

2.      Jika perlu tulislah kode atau nama bakteri pada sudut objek glass

3.      Bila menggunakan biakan cair maka pindahkan setetes biakan dengan pipet tetes atau dapat juga dipindahkan dengan jarum inokulum. Jangan lupa biakan di kocok terlebih dahulu. Jika digunakan biakan padat, maka biakan dipindahkan dengan jarum inokulum, satu ulasan saja kemudian diberi akuades dan disebarkan supaya merata.

4.      Keringkan ulasan tersebut sambil memfiksasinya dengan api bunsen.

5.      Setelah benar-benar kering dan tersebar selanjutnya ditetesi dengan pewarna Gram A, diamkan 3 menit.

6.      Cuci dengan air sebentar.

7.      Setelah itu ditetesi pewarna Gram B, diamkan selama 1 menit.

8.      Cuci dengan air sebentar.

9.      Larutkan warnanya dengan menetesi pewarna Gram C selama kurang leih 30 detik, sampai tidak keliahatan adanya merah yang luntur.

10.  Cuci dengan air sebentar.

11.  Tetesi dengan pewarna Gram D selama 30 detik.

12.  Cuci dengan air sampai bersih dan keringkan, siap dilihat di mikroskop.

Pengamatan               :

Escherichia coli.

Hasil                            :

Setelah dilakukan pengecatan,untuk bakteri jenis gram negative,yaitu  Escherichia coli dan dilihat di mikroskop perbesaran 100 kali,hasilnya berbentuk batang.

Pembahasan              :

1.      Hasil pengecatan gram negative ,Escherichia coli  seharusnya berwarna merah,tetapi dalam praktikum terjadi warna ungu,hal ini disebabkan mungkin karena pewarnaan dengan  gram A Kristal violet terlalu lama.

2.      Kita tidak melakukan pengecatan gram positif karena ketidaktersediaan suspense bakteri yang gram positif.

Kesimpulan                :

Bakteri Gram positif ( + ) akan berwarna violet, sedangkan bakteri Gram negatif ( - ) akan berwarna merah.

Daftar Pustaka                 :

Saputro, Budiyono. 2011. Bakteriologi Dasar, Edisi 2. Yogyakarta :Nusantara Press Jogjakarta.

Soemarno.  2000. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Klinik. Yogyakarta :Akademi Analis Kesehatan Yogyakarta

                                                                                                Semarang, 28 Maret 2012

                     Praktikan                                                                  Dosen pembimbing

1.      Nurul Aeni Nafulani        (P17434011073)

2.      Perwita Dwi Ilmiawati    (P17434011074)

3.      Pipin Nurdiantika Sari     (P17434011075)

4.      Rita Dewi Muhardini      (P17434011076)                          Drs. Soesanto, M.Kes