MENGHITUNG JUMLAH TROMBOSIT (Tanggal:Rabu,20 November 2012)

I.Bahan Pemeriksaan : Darah Vena dan kapiler

II.Tujuan                     :-Untuk mengetahui jumlah trombosit dan leukosit dalam lapang pandang

                                      -Untuk mengetahui jumlah trombosit dan erytrosit

III.Metode                  : Cara Langsung (Rees dan Ecker) dan Tak Langsung (Fonio)

IV.Prinsip                    :-Darah di campur dengan reagen rees ecker kedalam pipet erytrosit                       sampai tanda 101.

 -Dilakukan dengan penambahan Magnesium Sulfat yang berfungsi sebagai pengenceran .

V.Alat dan Bahan:

Pipet eritrosit                                                   darah kapiler

Bilik hitung                                                     darah vena

Lancet                                                             reagen rees ecker dan Giemsa

Mikroskop                                                       Magnesium sulfat

Kaca preparat                                                  Alkohol

VI.Dasar Teori

Trombosit berasal dari fragmentasi sitoplasma megakariosit, suatu sel muda yang besar dalam sumsum tulang. Megakariosit matang ditandai proses replikasi endomiotik inti dan makin besarnya volume plasma, sehingga pada akhirnya sitoplasma menjadi granular dan terjadi pelepasan trombosit. Setiap megakariosit mampu menghasilkan 3000 - 4000 trombosit, waktu dari diferensiasi sel asal (stem cell) sampai dihasilkan trombosit memerlukan waktu sekitar 10 hari. Umur trombosit pada darah perifer 7-10 hari. Trombosit adalah sel darah tak berinti, berbentuk cakram dengan diameter 1 - 4 mikrometer dan volume 7 – 8 fl. Trombosit dapat dibagi dalam 3 daerah (zona), zona daerah tepi berperan sebagai adhesi dan agregasi, zona “sol gel” menunjang struktur dan mekanisme interaksi trombosit, zona organel berperan dalam pengeluaran isi trombosit. Fungsi utama trombosit adalah pembentukan sumbatan mekanis sebagai respon hemostatik normal terhadap luka vaskuler, melalui reaksi adhesi, pelepasan, agregasi dan fusi serta aktivitas prokoagulannya. Nilai normal trombosit bervariasi sesuai metode yang dipakai. Jumlah trombosit normal menurut Deacie adalah 150 – 400 x 109 / L. Bila dipakai metode Rees Ecker nilai normal trombosit 140 – 340 x 109/ L, dengan menggunakan Coulter Counter harga normal 150 – 350 x 109/L. Dalam tulisan ini akan dibahas mengenai bahan pemeriksaan yang digunakan dalam pemeriksaan trombosit dalam laboratorium dan kelainan trombosit yang mungkin terjadi

VII.Cara Kerja:

·                     Cara Langsung (Rees dan Ecker)

1.                  Isaplah larutan REES ECKER ke dalam pipet eritrosit samapi garis tanda “1″ dan buanglah lagi cairan itu.

2.                  Isaplah darah sampai garis tanda “0,5″ dan cairan REES ECKER sampai garis tanda “101″. Segeralah kocok selama 3 menit.

3.                  Teruskan tindakan seperti menghitung eritrosit dalam kamar hitung.

4.                  Biarkan kamar hitung yang telah terisi dalam sikap datar dengan deglass tertutup selama 10 menit agar trombosit mengendap

5.                  Hitunglah semua trombosit dalam seluruh bidang besar di tengah-tengah (1 mm kuadrat) memakai lensa objektif besar.

6.                  Jumlah itu dikalikan 2.000 menghasilkan jumlah trombosit per ul darah.

·                     Cara tidak langsung (Fonio)

1.                  Bersihkan ujung jari dengan alkohol dan biarkan kering lagi.

2.                  Taruhlah di atas ujung jari tersebut setetes besar larutan magnesium sulfat 14%.

3.                  Tusuklah ujung jari dengan lanset melalui tetesan lar magnesium sulfat tersebut.

4.                  Setelah jumlah darah keluar kurang lebih 1/4 jumlah larutan magnesium sulfat, campurlah darah dengan magnesium sulfat tersebut.

5.                  Buatlah sedian hapus (dengan pewarnaan Giemsa)

6.                  Hitung jumlah trombosit yang dilihat bersama dengan 1.000 eritrosit.

7.                  Lakukanlah tindakan menghitung jumlah eritrosit per ul darah.

8.                  Perhitungkanlah jumlah trombosit per ul darah berdasarkan kedua angka itu.

Estimasi Barbara Brown

1.                  Bersihkan ujung jari dengan alkohol dan biarkan kering lagi.

2.                  Tusuklah ujung jari dengan lanset

3.                  Setelah jumlah darah keluar Buatlah sedian hapus (dengan pewarnaan Giemsa)

4.                  Hitung jumlah trombosit.

VIII.Hasil

CARA LANGSUNG                                                                                            CARA TIDAK LANGSUNG

Trombosit                                                                                                           Trombosit

Kotak 1 (Atas kiri):5                                                                                         Kotak 1 (Atas kiri):5

Kotak 2 (Atas kanan):4                                                                                   Kotak 2 (Atas kanan):4  

Kotak 3 (Bawah kanan):5                                                                              Kotak 3 (Bawah kanan):5

Kotak 4 (Bawah kiri):4                                                                                    Kotak 4 (Bawah kiri):4

Kotak 5 (Tengah):6                                                                                          Kotak 5 (Tengah):6

PERHITUNGAN:                                                                                                                Eritrosit                (bilik hitung)                      

                                                                                                      Kotak 1 (Atas kiri):1

=N X 10.000                                                                                                        Kotak 2 (Atas kanan):13               

=24 X 10.000                                                                                                       Kotak 3 (Bawah kanan):16

=240.000                                                                                                              Kotak 4 (Bawah kiri):15                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                  Kotak 5 (Tengah):6         

PERHITUNGAN :                              

BARBARA BROWN                                                                                           Eritrosit(apusan darah)

N= 20.000                                                                                             Kotak 1 (Atas kiri):229

   =306,666                                                                                                           Kotak 2 (Atas kanan):135

                                                                                                                                Kotak 3 (Bawah kanan):221

                                                                                                                                Kotak 4 (Bawah kiri):237

                                                                                                                                Kotak 5 (Tengah):254

                                                                                                                                PERHITUNGAN:                                                                                                                                                                                               =  X jumlah eritrosit

                                                                                                                                =  X 2.870.000

                                                                                                                                =189.420

IX.Pembahasan

Trombosit sukar dihitung karena mudah sekali pecah dan sukar dibedakan dengan kotoran kecil. Dan ditambah dengan sifatnya yang cenderung melekat pada permukaan asing (bukan endotel utuh) dan menggumpal-gumpal.Ada dua cara yang lazim di pakai, yaitu cara langsung dan cara tidak langsung. pada cara tidak langsung jumlah trombosit dibandingkan dengan jumlah eritrosit, sedangkan jumlah eritrosit itulah yang sebenarnya dihitung.Untuk mencegah trombosit melekat pada permukaan asing, dianjurkan untuk menggunakan alat-alat gelas yang dilapisi silikon atau alat-alat plastikPerlu diperhatikan dalam pengambilan sampel darah kapiler adalah sebelum penusukan dimulai keadaan setempat perlu diperhatikan dengan seksama, merupakan kontra indikasi adalah adanya bekas-bekas luka, keradangan, dermatitis ataupun oddema. Pengambilan darah kapiler dapat dilakukan bila jumlah darah yang dibutuhkan sedikit saja, atau dalam keadaan emergency, karena selain jumlah darah yang diambil sedikit sehingga jika terjadi kesalahan dalam pemeriksaan akan sulit untuk menanggulangi. Kesulitan-kesulitan yang sering terjadi dalam pengambilan sampel darah ini adalah, apabila kulit sekitar luka tusukan tidak kering karena alkohol atau keringat, maka tetesan darah yang keluar tidak dapat mengumpul melainkan menyebar ke sekitarnya sehingga sukar untuk mengambilnya. Lagipula bahan darah semacam ini tidak boleh digunakan karena sudah bercampur dengan bahan lain.
Darah tidak dapat keluar dengan lancar. Hal ini biasanya karena penusukan yang kurang dalam atau peredaran darah setempat kurang baik. Usaha untuk melancarkan pengeluaran darah dengan memijat akan sia-sia karena darah yang keluar tidak dapat dipergunakan karena sudah tercampur dengan cairan jaringan sehingga hasil pemeriksaan menunjukkan hasil yang lebih rendah dari yang sebenarnya. Pemeriksaan hitung jumlah trombosit dalam laboratorium dapat dilakukan secara langsung maupun tidak langsung. Secara langsung menggunakan metoda Rees Ecker, metoda Brecher Cronkite dan Cell Counter Automatic Metode Rees Ecker. Darah diencerkan dengan larutan BCB (Brilliant Cresyl Blue), sehingga trombosit akan tercat terang kebiruan. Trombosit dihitung dengan bilik hitung di bawah mikroskop, kemungkinan kesalahan metode Rees Ecker 16-25%.Metode Estimasi Babara Brown ini dilakukan dengan/anpa menggunakan MgSO4.Menghitung trombosit menggunakan lapang pandang 1000x dalam 10-15 kali lapang pandang.

REFERENSI.

Sotianingsih. Uji diagnostik pemeriksaan sediaan apus darah tepi dalam menilai fungsi agregasi trombosit.Dipresentasikan pada pertemuan PHTDI di Semarang, 2001. 

Sastroasmoro S, Ismael S. Dasar – dasar metodologi penelitian klinis. Jakarta . Sagung Seto, 2002. 

Budiwiyono I. Prinsip pemeriksaan preparat hapus darah tepi. Dalam : Imam BW, Purwanto AP ed. Workshop Hematologi III. Keganasan hematologik. Pembacaan preparat darah hapus (Workshop Hematologi III). Semarang. Bagian PK FK Undip, 1995 : 19 – 26.

MENGHITUNG JUMLAH ERITROSIT

I.Bahan Pemeriksaan : Darah EDTA

II.Tujuan                     :-Untuk mengetahui tehnik menghitung jumlah eritrosit

                                     -Untuk mengetahui jumlah eritrosit (normal atau tidak normal)

III.Metode                  :Bilik hitung

IV.Prinsip                    :Darah diencerkan dalam pipet eritrosit dengan larutan hayem kemudian di masukan ke dalam kamar hitung.Jumlah eritrosit dihitung dalam volume tertentu,dengan mengalikan terhadap factor erhitungan di peroleh jumlah eritrosit dalam  satuan volume darah.

V.Alat dan Bahan       :

-Mikroskop                                                                              -Darah EDTA

-Bilik Hitung                                                                           -Larutan Hayem

-Pipet erotrosit

-coloni counter

-Spuit

-Beaker glass

-tissue

VI.Dasar Teori

            Eritrosit merupakan tipe sel darah yang jumlahnya paling banyak dalam darah.Eritrosit berbentuk elips,pipih dan bernukleus yang berisi pigmen-pigmen pernafasan yang berwarna kuning hingga merah yang disebut hemoglobin yang berfungsi mengangkut oksigen (frandson,1992).Eritrosit normal 5juta-6juta sel/cc.Ukuran eritrosit 7,2µm.Jika hemoglobin sulit mengikat O2,maka akan terjadi hipoksia.

            Hitung eritrosit,bisa menegakkan diagnose kelainan pnyakit yang berhubungan dengan sel darah merah.Penggunaan larutanhayem,digunakan akan melisiskan sel darah kecuali eritrosit.

Jika sel eritrosit kurang bisa di sebabkan sumsum tulang bermasalah atau organ lain yang berhubungan dengan produksi sel eritrosit mengalami kelainan.

VII.Cara Kerja

1.                  Menyipkan alat dan bahan

2.                  Darah EDTA dihisap sampai tanda 0,5 dan larutan pengencer Hayem sampai tanda 101 lalu homogenkan

3.                  Kemudian membuang 3 tetesan pertama dari pipet eritrosit,setelah itu meneteskan ke kamar hitung (jangan terbentuk gelembung).

4.                  Melakukan pengamatan dengan mikroskop perbesaran 40x.

5.                  Hitunglah eritrosit yang terdapat 5 bidang yang tersusun dari 16 bidang kecil.

Cara menghitung sel sama seperti leukosit yaitu mulai dari kiri ke kanan kemudian kanan ke kiri dan selanjutnya.Dengan bantua alat hitung colony counter.

6.                  Perghitungan

VIII.Hasil Pengamatan

Kotak 1 (Atas kiri):62

Kotak 2 (Atas kanan):75

Kotak 3 (Bawah kanan):57

Kotak 4 (Bawah kiri):60

Kotak 5 (Tengah):70

Jumlah:324 eritrosit

Perhitungan: factor pengenceran:  =200 kali.

 =  

                   =

                   =N x 10.000.(Setiap 1 sel eritrosit=10.000)

Sehingga:

Jumlah sel eritrosit :N x 10.000

                                :324 x 10.000

                                :3.240.000 sel/cc =3,24 juta sel/mm³

IX.Pembahasan

Pada pemeriksaan hitung jumlah eritrosit dengan metode bili hitung yang harus dicermati adalah

1.Ketika Pengenceran

            Mengambil dengan mengisap darah EDTA sampai tanda 0,5,setalah itu dilanjutkan larutan hayem sampai tanda 101,homogenkan.

2.Kondisi bilik hitung

            Harus bersih,kering,dan bebas lemak sebelum digunakan,karena jika hal itu tidak terpenuhi ,berakibat pemeriksaan kurang valid

3.Pembesaran Mikroskop

            Amati dengan focus perbesaran 10 kali,baru 40 kali.Untuk hasil akurat,perbesaran 40 kali.

4.Larutan Pengencer

            Menggunakan hayem,agar sel darah yang terlihat hanya sel eritrosit,sel darah lain,lisis oleh larutanhaym

5.Perhitungan

            Tidak salah menghitung sel yang diluar garis-garis batas.Perhitungan mnggunakan coloni counter akan mempermudah ketika menghitung.

Nilai normal eritrosit adalah 4,3 juta-5,8 juta per mm³ atau ada yang menyebutkan 5-6juta per mm³.

Tujuan pemeriksaan ini,agar kita mengetahui jumlah eritrositnya sehingga kita dapat terdiagnosa dini akan penyakit yang timbul,seperti anemia,hipoksia.

Pengenceran dalam pipet eritrosit ialah 200 kali .Luas tiap bidang kecil 1400 mm³ ,tinggi kamar hitung 1/10 m,sedangkan eritrosit dihitung dalam 5 x 16 bidang kecil= 80 bidang kecil,yang jumlahnya 1/5 mm².Faktor untuk mendapatkan jumlah eritrosit per µl darah menjadi 5 x 10 x 200 =10.000.Sehingga harga 1 sel eritrosit yng di amati sama dengan 10.000 sel eritrosit.

            Kesalahan perhitungan,bisa karena tenaga kurang ahli atau tidak teliti bahkan reagen sudah tidak layak pakai.

X.Kesimpulan

Dari hasil perhitungan jumlah eritrosit pasien Novita Sari dinyatakan “TIDAK NORMAL” karena jumlah sel darah merah kurng dar nilai rujukan normal.

XI.Refferensi

.http://yayanakhyar.wordpress.com/2010/03/26/lab.menghitung-sel-sel darah/

.Gandasoebrata.”Penuntun Laboratorium KLinik”